PIG-A Double Nickase Plasmid (m): sc-422226-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PIG-A Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PIG-A Double-Nickase-Plasmid (m) und PIG-A Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Piga abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PIG-A: sc-374194
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PIG-A Double Nickase Plasmid (m) | sc-422226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PIG-A Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Piga** kodiert **PIG-A**, eine katalytische Untereinheit des Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-**N**-Acetylglucosaminyltransferase-Komplexes, der in der Membran des endoplasmatischen Retikulums die Biosynthese von GPI-Ankern initiiert. Indem PIG-A die Anheftung von GPI-Ankern ermöglicht, unterstützt es die Präsentation vielfältiger GPI-verankerter Proteine an der Zelloberfläche, die an Membranorganisation, Signaltransduktion, Zell-Zell-Interaktionen und immunbezogenen Prozessen beteiligt sind. Eine Störung von PIG-A beeinträchtigt den Aufbau der GPI-Anker und kann Transport und Stabilität GPI-gebundener Proteine verändern, wodurch Signalwege beeinflusst werden, die von lipidverankerten Rezeptoren und Enzymen abhängen. Eine PIGA-Fehlfunktion ist die zentrale genetische Läsion bei der paroxysmalen nächtlichen Hämoglobinurie und wird zudem mit angeborenen Glykosylierungsstörungen in Verbindung gebracht, wodurch **Piga** ein nützlicher Lokus für die Untersuchung glykosylierungsabhängiger Phänotypen und selektionsbasierter Genetik ist.
PIG-A Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Piga-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Piga abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Piga-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Piga-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.