PIASy CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403125

Übersicht

PIAS4 kodiert PIASy, eine SUMO-E3-Ligase, die die SUMOylierung von Proteinen moduliert, um Transkriptionsprogramme, DNA-Schadensantworten und die angeborene Immun-Signalübertragung fein abzustimmen. PIASy reguliert Aktivität, Lokalisation und Stabilität verschiedenster Transkriptionsfaktoren und Signalintermediate und verknüpft so eine SUMO-abhängige Kontrolle mit Signalwegen wie NF-κB, Interferonantworten und stressaktivierten Netzwerken. Über diese Mechanismen beeinflusst PIASy die Zellzyklusprogression, Apoptose sowie chromatinassoziierte Prozesse, die in der Krankheitsbiologie häufig gestört sind. Eine veränderte PIAS4-/PIASy-Funktion wurde im Kontext onkogener Signalübertragung, Entzündungsregulation und Phänotypen der Genomstabilität untersucht, die für Tumorentstehung und Modelle der zellulären Transformation relevant sind.

Das PIASy CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIAS4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIAS4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIAS4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIASy-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIAS4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIASy-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PIAS4-Exone abzielen, die für die PIASy-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIAS4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PIASy CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIASy CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIAS4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIASy HDR-Plasmid (h) und PIASy HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIAS4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIAS4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.