PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405423

Übersicht

PI4K2A kodiert die Phosphatidylinositol-4-Kinase II alpha (PI-4-Kinase II alpha), eine membranassoziierte Lipidkinase, die Phosphatidylinositol-4-phosphat (PI4P) bildet und damit die Phosphoinositid-Signalgebung sowie die Membranidentität unterstützt. Das von PI4K2A produzierte PI4P trägt zum Golgi- und endosomalen Transport, zur clathrinvermittelten Sortierung und zur nachgeschalteten Umwandlung von Phosphoinositiden bei, die den Rezeptortransport und die Signaldynamik beeinflusst. Über diese Funktionen in der Vesikelbiogenese und im Membranumbau ist PI4K2A für Studien zur Organisation des endomembranären Systems, zur Nährstoffsensorik und zu Stressantworten relevant. Veränderte Programme des Phosphoinositid-Stoffwechsels und der intrazellulären Transportprozesse, die mit PI4K2A in Verbindung stehen, wurden mit Mechanismen assoziiert, die in der Krebsbiologie, Neurobiologie und bei Wirt–Pathogen-Interaktionen eine Rolle spielen.

Das PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PI4K2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PI4K2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PI4K2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PI 4-kinase II α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PI4K2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PI 4-kinase II α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PI4K2A-Exone abzielen, die für die PI 4-kinase II α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PI4K2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PI4K2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PI 4-kinase II α HDR-Plasmid (h) und PI 4-kinase II α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PI4K2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PI4K2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.