PI 3-kinase p85α CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422233-ACT
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PI 3-kinase p85α CRISPR Activation Plasmid (m) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- PI 3-kinase p85α CRISPR Aktivierungsplasmide (m) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom PI 3-kinase p85α CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) und vom PI 3-kinase p85α CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der Pik3r1-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI 3-kinase p85α: sc-1637
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI 3-kinase p85α CRISPR Activation Plasmid (m) | sc-422233-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PI 3-kinase p85α CRISPR Activation Plasmid (m2) | sc-422233-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Pik3r1 kodiert die regulatorische Untereinheit p85α der Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Klasse IA, die die katalytischen p110‑Untereinheiten stabilisiert und sie an aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Adapterproteine rekrutiert. Über die Kontrolle der PI(3,4,5)P3‑Produktion moduliert PI3‑Kinase p85α die AKT/mTOR‑Signalübertragung und reguliert dadurch Zellwachstum, Stoffwechsel, Überleben und die Insulinrezeptor-Signalweiterleitung. In Mausmodellen beeinflusst eine veränderte Pik3r1‑Aktivität die Entwicklung und Funktion von Immunzellen, die Glukosehomöostase sowie die Reaktion auf Wachstumsfaktor-Stimulation. Eine fehlregulierte Signalübertragung im PI3K‑Signalweg ist breit an onkogenen Prozessen und Mechanismen metabolischer Erkrankungen beteiligt, wodurch Pik3r1 einen zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung des Signalwegs darstellt.
PI 3-kinase p85α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Pik3r1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
PI 3-kinase p85α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Pik3r1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Pik3r1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PI 3-kinase p85α-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Pik3r1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PI 3-kinase p85α-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PI 3-kinase p85α-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Pik3r1-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.