PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Particles (h): sc-402964-LAC
- Zielspezies: human
- 200 µl transduktionsfertige, hoch-titer CRISPR/dCas9 Lentivirale Aktivierungs-Partikel
- PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Particles (h) sind ein SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) gesteuertes System zur Transkriptionsaktivierung eines gewünschten Zielgens, um wirkungsvoll die spezifische Genexpression mittels lentiviraler Transduktion der Zellen zu erhöhen
- PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Particles (h) enthalten die folgenden SAM Aktivierungselemente: deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungs-Domäne VP64, ein MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein und eine zielspezifische 20nt gRNA. Des Weiteren enthalten sind die Resistenzgene für blasticidin, hygromycin und puromycin
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die von PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Plasmid (h) und PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Plasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen des PIK3R3-Promotors ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz der Genaktivierung per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI 3-kinase p55γ Antibody (E-9): sc-376615
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI 3-kinase p55γ Lentiviral Activation Particles (h) | sc-402964-LAC | 200 µl | $455.00 |
PIK3R3 kodiert die regulatorische Untereinheit p55γ der Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Klasse IA, die aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen und Adapterproteine mit den katalytischen p110-Isoformen koppelt. Durch die Modulation der PI(3,4,5)P3-Produktion koordiniert die PI3K-Signalübertragung die Aktivität des AKT–mTOR-Signalwegs und beeinflusst damit Zellwachstum, Überleben, Stoffwechsel und die Dynamik des Zytoskeletts. Eine veränderte Regulation von Komponenten des PI3K-Signalwegs ist häufig mit onkogenen Signalen, aberranter Proliferation und einer erhöhten Resistenz gegenüber zellulärem Stress verbunden, was PIK3R3 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Analyse des Signalwegs macht. In immunologischen und epithelialen Kontexten können p55γ-abhängige PI3K-Ausgänge zudem Motilität und Signalweg-Crosstalk prägen, die entzündliche sowie tumorassoziierte Programme des Mikromilieus beeinflussen.
PI 3-kinase p55γ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PIK3R3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.
PI 3-kinase p55γ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PIK3R3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PI 3-kinase p55γ-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PIK3R3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.
Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.