Plasmide CRISPR d'Activation (m) PI 3-kinase p110δ: sc-422232-ACT

Pik3cd code pour la sous-unité catalytique p110δ de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) de classe I, une enzyme clé qui convertit le PIP2 en PIP3 afin d’initier la signalisation en aval AKT/mTOR. La PI3K p110δ est particulièrement exprimée dans les lignées hématopoïétiques et soutient la signalisation des récepteurs antigéniques, la migration induite par les chimiokines et les programmes de survie médiés par les cytokines qui façonnent l’activation et la différenciation des cellules immunitaires. Une activité altérée de Pik3cd peut perturber l’homéostasie immunitaire et la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour disséquer la transduction du signal dans les leucocytes. Dans des modèles murins, la modulation de p110δ offre un point d’entrée maniable pour étudier les interactions de voies avec MAPK, NF‑κB et le contrôle métabolique de la fonction immunitaire.

PI 3-kinase p110δ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pik3cd sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI 3-kinase p110δ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pik3cd dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pik3cd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI 3-kinase p110δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pik3cd natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI 3-kinase p110δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI 3-kinase p110δ dans les cellules tumorales présentant une expression de Pik3cd silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.