Plasmide CRISPR d'Activation (h) PI 3-kinase p110 δ: sc-400426-ACT

PIK3CD code la sous-unité catalytique p110δ de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) de classe I, un régulateur clé de la transduction du signal en aval des récepteurs de l’antigène, des récepteurs de cytokines et de certaines tyrosine kinases réceptrices. PI3K p110δ catalyse la production de PIP3 afin d’activer la signalisation AKT‑mTOR, modulant ainsi le développement, l’activation et la survie des lymphocytes, ainsi que leur reprogrammation métabolique, et influençant la chimiotaxie et le trafic vésiculaire via des effecteurs en aval. Une activité dérégulée de PIK3CD perturbe l’homéostasie immunitaire et la signalisation inflammatoire, et fait l’objet de nombreuses études dans des contextes tels que l’immunodéficience, l’auto-immunité et la biologie des hémopathies malignes. En tant que nœud au sein de réseaux liés à PI3K/AKT, mTOR et NF‑κB, p110δ constitue un levier exploitable pour disséquer les interactions entre voies de signalisation dans des modèles cellulaires pertinents pour l’immunologie et le cancer.

PI 3-kinase p110 δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIK3CD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI 3-kinase p110 δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIK3CD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIK3CD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI 3-kinase p110 δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIK3CD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI 3-kinase p110 δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI 3-kinase p110 δ dans les cellules tumorales présentant une expression de PIK3CD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.