PHT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425761

Descripción general

Slc15a3 codifica el transportador de histidina/dipeptidos acoplado a protones PHT2, un miembro de la familia SLC15 implicado en el transporte de solutos endolisosomales y en el manejo intracelular de péptidos. Al acoplar el transporte de péptidos a gradientes de protones, PHT2 contribuye a la homeostasis lisosomal, la detección de nutrientes y la comunicación entre el tráfico vesicular y los programas metabólicos en células mieloides y otros tipos celulares relevantes para la inmunidad. La actividad alterada de la familia SLC15 se ha vinculado con una señalización innata desregulada y estados inflamatorios, lo que convierte a Slc15a3 en un nodo útil para estudiar cómo el transporte endosomal/lisosomal influye en las respuestas de citocinas y en vías asociadas al procesamiento de antígenos. En sistemas murinos, la perturbación de Slc15a3 permite la interrogación mecanística de procesos dependientes del pH vesicular que moldean la activación inmunitaria y modelos de inflamación tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PHT2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc15a3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc15a3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc15a3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PHT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc15a3 para la investigación de la señalización de PHT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc15a3 críticos para la función de PHT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc15a3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PHT2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PHT2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc15a3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PHT2 (m) y el plásmido HDR PHT2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc15a3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc15a3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.