Phox2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401351

Übersicht

PHOX2B kodiert Phox2b, einen paired-like Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Entwicklung des autonomen Nervensystems und die Differenzierung noradrenerger Neuronen steuert, indem er während der Musterbildung von Neuralleiste und Hinterhirn Genexpressionsprogramme kontrolliert. Phox2b reguliert transkriptionelle Netzwerke, die an der Catecholamin-Biosynthese, der neuronalen Spezifizierung und Reifung beteiligt sind, und ist in Signalwege eingebunden, die Schicksalsentscheidungen neuronaler Vorläuferzellen sowie die Linienfestlegung im peripheren Nervensystem prägen. Eine veränderte PHOX2B-Funktion ist eng mit Neurokristopathien, einschließlich des kongenitalen zentralen Hypoventilationssyndroms, sowie mit Entwicklungstumoren neuralleisten Ursprungs wie dem Neuroblastom assoziiert, was seine Rolle bei der Etablierung und Aufrechterhaltung der autonomen neuronalen Identität widerspiegelt. Als linienbestimmender Regulator ist PHOX2B ein hilfreicher Ansatzpunkt zur Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle der Neuroentwicklung sowie der Mechanismen von Zellzustandsstabilität und Reprogrammierung.

Das Phox2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHOX2B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHOX2B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHOX2B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Phox2b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHOX2B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Phox2b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHOX2B-Exone abzielen, die für die Phox2b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHOX2B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Phox2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Phox2b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHOX2B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Phox2b HDR-Plasmid (h) und Phox2b HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHOX2B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHOX2B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.