Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PHIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407159
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PHIP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PHIP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PHIP Anticuerpo (B-1): sc-398614
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PHIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407159 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PHIP (proteína que interactúa con el dominio de homología a pleckstrina, *pleckstrin homology domain interacting protein*) codifica un andamiaje nuclear y citoplasmático que se asocia con la señalización del sustrato del receptor de insulina y con complejos asociados a la cromatina para influir en programas transcripcionales y en la regulación del estado celular. A través de interacciones vinculadas a la señalización PI3K–AKT y a la regulación de la expresión génica, PHIP contribuye al control del crecimiento celular, las respuestas metabólicas y la progresión del ciclo celular. Se han descrito alteraciones genéticas o expresión desregulada de PHIP en múltiples tipos de cáncer, y se estudia su relación con fenotipos de proliferación e invasión de células tumorales, así como con la respuesta al tratamiento. Además, PHIP se ha implicado en trastornos del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia en vías que acoplan entradas de señalización con salidas transcripcionales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PHIP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PHIP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PHIP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PHIP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PHIP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PHIP para la investigación de la señalización de PHIP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PHIP críticos para la función de PHIP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PHIP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PHIP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PHIP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PHIP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PHIP (h) y el plásmido HDR PHIP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PHIP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PHIP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.