PHF8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407306

Übersicht

PHF8 kodiert eine Histon-Demethylase mit JmjC-Domäne, die H3K4me3 über ihren PHD-Finger erkennt und repressive Lysin-Methylierungsmarkierungen wie H3K9me2/1 und H4K20me1 entfernt, um die Chromatinzugänglichkeit zu modulieren. Über die epigenetische Kontrolle der Transkription trägt PHF8 zur Zellzyklusprogression, zu DNA-Schadensantworten und zu linienspezifischen Differenzierungsprogrammen bei. Die PHF8-Funktion steht in Wechselwirkung mit Signalwegen des Chromatin-Remodelings und der Transkriptionsregulation, die während der Entwicklung Genexpressionsnetzwerke formen. Eine Fehlregulation oder Mutation von PHF8 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie veränderten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, wie sie bei der krebsassoziierten epigenetischen Reprogrammierung beobachtet werden.

Das PHF8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHF8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHF8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHF8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHF8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHF8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHF8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHF8-Exone abzielen, die für die PHF8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHF8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHF8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PHF8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHF8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHF8 HDR-Plasmid (h) und PHF8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHF8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHF8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.