PHC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406576

Übersicht

PHC3 (polyhomeotic homolog 3) ist eine zentrale Komponente des Polycomb-Repressionskomplexes 1 (PRC1), die zur Chromatinkondensation und zur stabilen transkriptionellen Stilllegung von Entwicklungs- und Zellidentitätsgenen beiträgt. Über Polycomb-abhängige epigenetische Regulation ist PHC3 an der Aufrechterhaltung von Linienprogrammen und an der Regulation der Proliferation beteiligt, indem es über histonubiquitinierungsverknüpfte repressive Chromatinzustände mitwirkt. Veränderte Polycomb-Aktivität und eine fehlregulierte, PRC1-assoziierte Repression werden häufig mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und aberranter Differenzierung in Verbindung gebracht, was PHC3 für Studien zur Tumorbiologie und epigenetischen Kontrolle relevant macht. Die Funktion von PHC3 dient zudem als Readout, um zu verstehen, wie Chromatinregulatoren während der Entwicklung und bei Stressantworten Gennetzwerke koordinieren.

Das PHC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHC3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHC3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHC3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHC3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHC3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHC3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHC3-Exone abzielen, die für die PHC3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHC3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PHC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHC3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHC3 HDR-Plasmid (h) und PHC3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHC3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHC3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.