phapi2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422189

Panoramica

Il gene murino **Pemt** codifica la fosfatidiletanolamina N-metiltransferasi, un enzima chiave nella biosintesi della fosfatidilcolina che catalizza la metilazione sequenziale della fosfatidiletanolamina utilizzando la S-adenosilmetionina. Questa attività sostiene l’omeostasi dei fosfolipidi di membrana, l’assemblaggio delle lipoproteine e il metabolismo dei donatori di gruppi metile, collegando PEMT al rimodellamento lipidico e alle risposte cellulari allo stress. La produzione di fosfatidilcolina dipendente da Pemt è particolarmente rilevante per la gestione dei lipidi a livello epatico, la funzione del reticolo endoplasmatico (RE) e i processi di segnalazione che dipendono dalla composizione della membrana. L’alterazione delle vie mediate da PEMT è stata associata a fenotipi di metabolismo lipidico modificati e fornisce un modello maneggevole per lo studio di meccanismi metabolici e associati alle membrane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO phapi2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pemt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pemt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pemt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina phapi2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pemt per lo studio della segnalazione di phapi2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pemt critici per la funzione di phapi2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pemt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal phapi2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal phapi2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pemt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal phapi2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR phapi2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pemt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pemt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.