PGRMC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401945-ACT

O componente 1 do receptor de progesterona associado à membrana (PGRMC1) é uma proteína associada à membrana que se liga ao heme, implicada na sinalização de esteroides, na regulação do citocromo P450 e nas respostas celulares ao estresse oxidativo e metabólico. Em células humanas, o PGRMC1 tem sido associado à modulação da homeostase de lipídios e colesterol, ao tráfego endomembranar e a processos associados às mitocôndrias que influenciam programas de proliferação e sobrevivência. Ele participa de vias que afetam a comunicação cruzada entre receptores e a sinalização por quinases, com conexões relatadas a respostas ao estresse do retículo endoplasmático (RE) e ao equilíbrio redox. A expressão desregulada de PGRMC1 foi observada em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo biologia do câncer, neurobiologia e fenótipos metabólicos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização de membrana e adaptação celular ao estresse.

PGRMC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGRMC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGRMC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGRMC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGRMC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGRMC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGRMC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGRMC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGRMC1 em células tumorais com expressão de PGRMC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.