Particules Lentivirales d'Activation (h) PGD synthase: sc-405437-LAC

Le gène humain HPGDS code la prostaglandine D synthase hématopoïétique (PGD synthase), une enzyme dépendante du glutathion qui convertit la prostaglandine H2 en prostaglandine D2 au sein du réseau de biosynthèse de l’acide arachidonique et des eicosanoïdes. La PGD2 et ses métabolites en aval régulent la chimiotaxie des leucocytes, la signalisation des cytokines, le tonus vasculaire et la commutation de classe des médiateurs lipidiques, reliant l’activité de HPGDS aux processus immunitaires et inflammatoires. L’expression de HPGDS est marquée dans les mastocytes et d’autres lignées hématopoïétiques, et elle est couramment étudiée dans le contexte de l’inflammation allergique, de l’asthme et, plus largement, des mécanismes des maladies inflammatoires. Comme la signalisation de la PGD2 fait intervenir les voies des récepteurs DP1/DP2 et recoupe le stress oxydant ainsi que l’équilibre leucotriènes/prostaglandines, HPGDS constitue un nœud utile pour analyser les programmes transcriptionnels pilotés par les médiateurs lipidiques.

Les particules d'activation lentivirales PGD synthase (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HPGDS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PGD synthase (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HPGDS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PGD synthase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HPGDS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.