Plasmide CRISPR d'Activation (m) PGAM5: sc-428371-ACT

Le gène murin **Pgam5** code **PGAM5**, une phosphatase sérine/thréonine de la membrane externe mitochondriale qui intègre l’état métabolique aux voies de signalisation du stress et au contrôle qualité des mitochondries. PGAM5 participe à la dynamique mitochondriale en régulant la machinerie de fission et s’articule avec les voies de mitophagie, contribuant ainsi à déterminer la réponse au stress oxydatif et à la dépolarisation membranaire. Elle a été associée à la mort cellulaire programmée et à des cascades de signalisation inflammatoire, notamment via la modulation d’ASK1/JNK et de réseaux MAPK apparentés activés par le stress. Le dérèglement des voies associées à PGAM5 est pertinent dans des modèles de neurodégénérescence, de lésion d’ischémie-reperfusion et de dommages tissulaires d’origine immunitaire, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques des réponses mitochondriales au stress.

PGAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pgam5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pgam5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pgam5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGAM5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pgam5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGAM5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGAM5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pgam5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.