Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PFKL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402662
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PFKL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PFKL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PFKL Anticuerpo (A-6): sc-393713
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PFKL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402662 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PFKL codifica la isoforma hepática de la fosfofructoquinasa-1 (PFK-1), una enzima clave y limitante de la velocidad que cataliza la conversión de fructosa-6-fosfato en fructosa-1,6-bisfosfato durante la glucólisis. Al integrar señales alostéricas derivadas del estado energético y metabólico celular, PFKL ayuda a coordinar el flujo glucolítico con las demandas biosintéticas y el equilibrio redox. Se han asociado cambios en la actividad y la expresión de PFKL con la reprogramación metabólica en estados proliferativos, contribuyendo a modificaciones en la utilización de glucosa, la producción de lactato y el direccionamiento posterior del carbono hacia otras rutas. Como nodo central de la glucólisis, PFKL se investiga con frecuencia en estudios sobre homeostasis energética, adaptación al estrés y dependencias metabólicas relevantes para fenotipos asociados a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PFKL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PFKL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PFKL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PFKL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PFKL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PFKL para la investigación de la señalización de PFKL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PFKL críticos para la función de PFKL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PFKL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PFKL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PFKL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PFKL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PFKL (h) y el plásmido HDR PFKL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PFKL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PFKL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.