Plasmide Double Nickase (h) PFKFB4: sc-410933-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PFKFB4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PFKFB4 Double Nickase (h) et le plasmide PFKFB4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PFKFB4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PFKFB4 Antibody (A-1): sc-514792
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PFKFB4 | sc-410933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PFKFB4 | sc-410933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PFKFB4 code la 6‑phosphofructo‑2‑kinase/fructose‑2,6‑bisphosphatase 4, une enzyme bifonctionnelle qui contrôle les niveaux cellulaires de fructose‑2,6‑bisphosphate, un puissant activateur allostérique de la PFK‑1 et un régulateur clé du flux glycolytique. En ajustant l’équilibre entre la glycolyse et la voie des pentoses phosphates, PFKFB4 contribue à l’homéostasie bioénergétique, au contrôle rédox via la production de NADPH et à la disponibilité de précurseurs biosynthétiques. L’activité de PFKFB4 relie la détection des nutriments à la reprogrammation métabolique et peut influencer la prolifération, la survie en condition de stress et les réponses à l’hypoxie. Une expression ou une fonction dérégulée de PFKFB4 a été associée à des phénotypes métaboliques altérés observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par une perturbation du métabolisme du glucose.
PFKFB4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PFKFB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PFKFB4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PFKFB4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PFKFB4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.