PFK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401023

概要

PFKMは、解糖系の律速酵素であるホスホフルクトキナーゼ-1（PFK-1）の筋肉型アイソフォームをコードしており、ATP依存的にフルクトース-6-リン酸をフルクトース-1,6-ビスリン酸へ変換する反応を触媒します。解糖系フラックスの主要な制御点として、PFK-1は細胞のエネルギー状態や代謝物によるアロステリック調節を統合し、ATP需要に応じてグルコース利用を協調させます。PFKM活性は、中心炭素代謝、乳酸産生、ならびに増殖やストレス適応プログラムに結びつく下流の生合成経路に影響を与えます。PFKMの遺伝学的破綻は糖原病VII型（Tarui病）と関連しており、解糖系の変化が代謝機能不全や、神経筋・血液系の生物学に関わる細胞表現型にどのように寄与するかを調べるために用いられます。

PFK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPFKM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PFKM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PFKMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PFK-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PFK-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PFKM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PFK-1の機能に不可欠なPFKMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PFKMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PFK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPFK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PFKM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PFK-1 HDRプラスミド（h）および PFK-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPFKMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPFKM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。