Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425227

Übersicht

Pex3 kodiert Peroxin 3, einen zentralen Faktor der Peroxisomenbiogenese, der an der peroxisomalen Membran lokalisiert ist und den Aufbau der Membran initiiert, indem er weitere Peroxine rekrutiert, die für den Import von Matrixproteinen erforderlich sind. Durch seine Rolle bei der Peroxisomenbildung unterstützt PEX3 lipidmetabolische Signal- und Stoffwechselwege, darunter die β‑Oxidation sehr langkettiger Fettsäuren, die Synthese von Etherphospholipiden (Plasmalogenen) und die Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies. Ein Verlust der peroxisomalen Funktion stört die zelluläre Redoxhomöostase und die Zusammensetzung von Membranlipiden und beeinflusst dadurch den Crosstalk mit Mitochondrien sowie inflammatorische Signalwege. In Mäusen wird Pex3 häufig untersucht, um Defekte der Peroxisomenbiogenese zu modellieren und zu erforschen, wie der Verlust von Peroxisomen die Neuroentwicklung, den hepatozellulären Stoffwechsel und die systemische Energiebilanz beeinflusst.

Das Peroxin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pex3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pex3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pex3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Peroxin 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pex3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Peroxin 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pex3-Exone abzielen, die für die Peroxin 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pex3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Peroxin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Peroxin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pex3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Peroxin 3 HDR-Plasmid (m) und Peroxin 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pex3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pex3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.