Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h): sc-405075-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Peroxin 14 Double-Nickase-Plasmid (h) und Peroxin 14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PEX14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Peroxin 14: sc-293383
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PEX14 kodiert Peroxin 14, einen integralen Bestandteil der peroxisomalen Membran, der während des Imports von Matrixenzymen mit PTS1- und PTS2-Targeting-Signalen als Dockingfaktor für die Rezeptorkomplexe PEX5 und PEX7 fungiert. In dieser Funktion ist PEX14 zentral für die Peroxisomenbiogenese, die Aufrechterhaltung der Proteostase des Organells sowie für Stoffwechselwege einschließlich der β-Oxidation sehr langkettiger Fettsäuren und der zellulären Redoxhomöostase. Eine Störung des PEX14-abhängigen Imports beeinträchtigt den peroxisomalen Stoffwechsel und kann sekundär die Mitochondrienfunktion, Lipidsignale und den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies beeinflussen. Eine Fehlregulation der Peroxisomenassemblierung und der Importmaschinerie wird mit Peroxisomenbiogenesestörungen sowie mit breiteren Mechanismen in Zusammenhang gebracht, die für die Neuroentwicklung und metabolische Dysfunktionen relevant sind.
Peroxin 14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PEX14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PEX14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PEX14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PEX14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.