PERK Lentiviral Activation Particles (h): sc-400080-LAC

Humanes **EIF2AK3** kodiert **PERK**, eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte transmembrane Kinase, die als primärer Sensor für ER-Stress in der **Unfolded-Protein-Response (UPR)** fungiert. Nach Aktivierung phosphoryliert PERK **eIF2α**, um die globale Translation abzuschwächen, während gleichzeitig die selektive Translation stressresponsiver Transkripte wie **ATF4** gefördert wird. Dadurch koordiniert PERK Redox-Homöostase, Aminosäurestoffwechsel und Autophagieprogramme. Die PERK-Signalgebung ist mit Proteostase, mitochondrialer Funktion und inflammatorischen Signalwegen verknüpft und beeinflusst bei anhaltendem Stress die Entscheidung zwischen Anpassung und Apoptose. Eine fehlregulierte EIF2AK3/PERK-Aktivität wird mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch chronischen ER-Stress gekennzeichnet sind, darunter Neurodegeneration, metabolische Dysfunktion und Anpassungsprozesse im Tumormikromilieu, was PERK zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stresssignalgebung macht.

PERK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EIF2AK3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PERK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EIF2AK3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PERK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EIF2AK3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.