Perilipin Double Nickase Plasmid (m): sc-430499-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Perilipin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Perilipin Double-Nickase-Plasmid (m) und Perilipin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Plin1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Perilipin Double Nickase Plasmid (m) | sc-430499-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Perilipin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-430499-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Plin1 kodiert Perilipin, ein mit Lipidtröpfchen assoziiertes Gerüstprotein, das die Triglyceridspeicherung in Adipozyten reguliert, indem es den Zugang zytosolischer Lipasen zur Oberfläche des Tröpfchens steuert. Perilipin integriert PKA‑vermittelte Phosphorylierungssignale, um während der Lipolyse die Aktivität von ATGL und der hormonsensitiven Lipase zu koordinieren, und koppelt damit die cAMP‑Signalübertragung an die Mobilisierung von Fettsäuren und die Energiehomöostase. Eine veränderte Plin1‑Expression oder ‑Funktion stört die Dynamik von Lipidtröpfchen und den Stoffwechsel des Fettgewebes, was es für Studien zu Adipositas, Insulinresistenz, hepatischer Steatose und Entzündungsprozessen im Zusammenhang mit einer dysregulierten Lipidverarbeitung relevant macht. Neben Adipozyten wird eine Plin1‑abhängige Umgestaltung von Lipidtröpfchen auch genutzt, um den Crosstalk zwischen Organellen zu untersuchen, einschließlich ER–Lipidtröpfchen‑Interaktionen und oxidativer Stressantworten.
Perilipin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Plin1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Plin1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Plin1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Plin1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.