Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418415

Übersicht

PGA4 kodiert Pepsin A4, eine aspartische Endopeptidase, die in der Magenschleimhaut als sezerniertes Zymogen gebildet und unter sauren Bedingungen aktiviert wird, um Nahrungs- und körpereigene Proteine zu spalten. Als Mitglied der Pepsin-Familie trägt Pepsin A4 zur proteostatischen Balance im Gastrointestinaltrakt bei, indem es die Peptidbildung, die luminale Proteinverdauung sowie die nachgeschaltete Verfügbarkeit von Antigenen und Nährstoffen beeinflusst. Seine Aktivität ist in die Biologie der Magensäure und in Prozesse der mukosalen Barriere eingebunden; veränderte Expression oder ein verschobenes Proteasegleichgewicht wird häufig in Studien zum Umbau des Magenepithels und zu entzündungsassoziierten Pathologien untersucht. PGA4 ist daher relevant, um proteaseabhängige Signal- und Stoffwechselwege im Magen zu analysieren und für biomarkerorientierte Forschung in Kontexten von Magenerkrankungen.

Das Pepsin A4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PGA4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PGA4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PGA4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pepsin A4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PGA4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pepsin A4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PGA4-Exone abzielen, die für die Pepsin A4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PGA4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pepsin A4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Pepsin A4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PGA4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pepsin A4 HDR-Plasmid (h) und Pepsin A4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PGA4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PGA4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.