PEPCK-M/PCK2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400725-NIC

O PCK2 humano codifica a isoforma mitocondrial da fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK-M), uma enzima-chave da gliconeogênese e anaplerótica que converte oxaloacetato em fosfoenolpiruvato, conectando intermediários do ciclo do TCA (ciclo do ácido cítrico) a vias biossintéticas citosólicas. Ao modular o fluxo de carbono entre os compartimentos mitocondrial e citosólico, o PCK2 influencia o metabolismo de glicose e lipídios, o equilíbrio redox e a utilização de aminoácidos sob estresse nutricional. A atividade do PCK2 interage com vias que regem a adaptação metabólica, incluindo gliconeogênese, cataplerose e redes de serina/glicina e gliceroneogênese. A expressão ou função desregulada do PCK2 tem sido associada a estados metabólicos alterados observados no metabolismo do câncer, na resistência à insulina e em outros distúrbios caracterizados por perturbações na homeostase mitocondrial e da glicose.

PEPCK-M/PCK2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PCK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PCK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PCK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PCK2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.