PEPCK-M/PCK2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400725-NIC

ヒトPCK2は、ミトコンドリア型ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（PEPCK-M）アイソフォームをコードする。PEPCK-Mは糖新生およびアナプレロティック反応における主要酵素で、オキサロ酢酸をホスホエノールピルビン酸へ変換し、TCA回路中間体と細胞質の生合成経路とを結び付ける。ミトコンドリア区画と細胞質区画の間の炭素フラックスを調節することで、PCK2は栄養ストレス下におけるグルコースおよび脂質代謝、酸化還元バランス、アミノ酸利用に影響を与える。PCK2の活性は、糖新生、カタプレロシス、ならびにセリン／グリシンおよびグリセロネオジェネシスのネットワークを含む、代謝適応を制御する経路と交差する。PCK2の発現や機能の異常は、がん代謝、インスリン抵抗性、その他ミトコンドリア機能やグルコース恒常性の破綻を特徴とする疾患で観察される代謝状態の変化と関連している。

PEPCK-M/PCK2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PCK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PCK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PCK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PCK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。