PELP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405376-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PELP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PELP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PELP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PELP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PELP1: sc-390599
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PELP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405376-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PELP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405376-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PELP1 (prolin-, glutaminsäure- und leucinreiches Protein 1) ist ein Koregulator nukleärer Rezeptoren, der die Signalübertragung des Östrogenrezeptors und anderer Steroidrezeptoren mit Chromatin-Remodellierung und transkriptioneller Kontrolle verknüpft. Es fungiert als Gerüstprotein für Komplexe, die rezeptorgesteuerte Genexpression mit Zellzyklusprogression, Ribosomenbiogenese und Signalwegen der DNA-Schadensantwort koppeln, und kann zwischen Zellkern und Zytoplasma shutteln, um die Kinase-Signalgebung zu modulieren. Durch diese Interaktionen trägt PELP1 zu hormonabhängigen Transkriptionsprogrammen und umfassenderen regulatorischen Netzwerken bei, die Proliferation, Überleben und Genomstabilität beeinflussen. Eine fehlregulierte PELP1-Expression oder -Lokalisation wurde in mehreren Krebskontexten mit veränderter onkogener Signalgebung und Krankheitsprogression in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als mechanistisches Ziel in signalwegfokussierten Studien unterstützt.
PELP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PELP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PELP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PELP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PELP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.