PECI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406564

Descripción general

ECI2 codifica la isomerasa peroxisomal D3,D2-enoil-CoA (PECI), una enzima auxiliar necesaria para la β‑oxidación peroxisomal de acil‑CoA de ácidos grasos insaturados. PECI cataliza pasos de isomerización que permiten continuar el acortamiento de la cadena y la coordinación con las reacciones posteriores de deshidrogenación y tiolisis, lo que sostiene el catabolismo lipídico y la homeostasis energética celular. A través de su función en el metabolismo peroxisoma‑dependiente de ácidos grasos, ECI2 contribuye a la regulación de la señalización lipídica, el equilibrio redox y la adaptación metabólica bajo estrés nutricional. La desregulación de la β‑oxidación peroxisomal y del procesamiento de ácidos grasos insaturados es relevante para mecanismos de enfermedades metabólicas, fenotipos de almacenamiento de lípidos y una remodelación metabólica más amplia observada en contextos de investigación sobre cáncer y neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PECI (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ECI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ECI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ECI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PECI.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ECI2 para la investigación de la señalización de PECI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ECI2 críticos para la función de PECI
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ECI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PECI CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PECI CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ECI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PECI (h) y el plásmido HDR PECI (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ECI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ECI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.