PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double Nickase Plasmid (h): sc-400107-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double-Nickase-Plasmid (h) und PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDGFRA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDGF Receptor alpha/PDGFRA: sc-398206
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double Nickase Plasmid (h) | sc-400107-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDGF Receptor alpha/PDGFRA Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400107-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDGFRA kodiert den platelet-derived growth factor receptor alpha (PDGFRα), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die PDGF-Liganden bindet und dadurch Dimerisierung sowie Autophosphorylierung auslöst. Aktivierter PDGFRα schaltet nachgeschaltete Signalnetzwerke ein, darunter die PI3K–AKT-, RAS–MAPK- und PLCγ-Signalwege, und koordiniert so Proliferation, Überleben, Migration und die Differenzierung mesenchymaler Zelllinien. Die PDGFRA-Aktivität trägt während Entwicklung und Gewebehomöostase zur stromal-epithelialen Kommunikation und zum Umbau der extrazellulären Matrix bei. Fehlregulierte PDGFRA-Signalgebung und strukturelle Veränderungen sind an onkogenen Wachstumsprogrammen und fibrotischem Remodeling beteiligt, weshalb PDGFRA häufig im Fokus von Studien zur Biologie von Rezeptor-Tyrosinkinasen und zur Signalgebung im Tumormikromilieu steht.
PDGF Receptor alpha/PDGFRA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDGFRA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDGFRA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDGFRA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDGFRA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.