Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDGF Receptor alpha/PDGFRA: sc-400107-ACT

PDGFRA code le récepteur alpha du facteur de croissance dérivé des plaquettes (platelet-derived growth factor receptor alpha), une tyrosine kinase réceptrice qui se lie aux ligands PDGF afin d’initier l’autophosphorylation et une signalisation en aval via les voies PI3K–AKT, RAS–MAPK et PLCγ. Cette signalisation régule la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire, avec des rôles importants dans la biologie mésenchymateuse et stromale au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Une activité dérégulée de PDGFRA est impliquée dans des programmes de signalisation anormaux aux facteurs de croissance observés dans plusieurs contextes associés au cancer, ainsi que dans des microenvironnements fibroprolifératifs et inflammatoires. En tant que nœud kinase de surface cellulaire, PDGFRA est fréquemment étudié pour les mécanismes qui contrôlent le trafic du récepteur, la cinétique de signalisation dépendante du ligand et les interactions entre voies de signalisation.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDGFRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDGFRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDGFRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDGF Receptor alpha/PDGFRA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDGFRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDGF Receptor alpha/PDGFRA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDGF Receptor alpha/PDGFRA dans les cellules tumorales présentant une expression de PDGFRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.