Plasmide Double Nickase (h) PDGF-A: sc-400711-NIC

Le gène humain **PDGFA** code le facteur de croissance dérivé des plaquettes A (**PDGF-A**), un mitogène sécrété qui signale principalement via le récepteur **PDGFRα** et les dimères **α/β** afin de réguler la prolifération, la migration et la survie des cellules mésenchymateuses. L’activité de PDGF-A engage les cascades de signalisation **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** et **PLCγ**, qui coordonnent le remodelage de la matrice extracellulaire, le soutien angiogénique et la communication stroma–épithélium. Une dérégulation de la signalisation **PDGFA/PDGFR** est impliquée dans le remodelage fibrotique et la biologie du microenvironnement tumoral, où des signaux paracrines de facteurs de croissance altérés peuvent reprogrammer les programmes vasculaires et stromaux. En conséquence, **PDGFA** est fréquemment étudié dans la mise en place des patrons développementaux, les processus associés à la cicatrisation, et les transitions d’état cellulaire induites par des facteurs de croissance.

PDGF-A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDGFA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDGFA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDGFA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDGFA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.