Plasmide Double Nickase (h) PDF: sc-409495-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PDF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PDF Double Nickase (h) et le plasmide PDF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PDF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PDF | sc-409495-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **PDF** (peptide déformylase, mitochondriale) code une métalloprotéase qui retire les groupements **N‑formyle** des polypeptides naissants codés par le génome mitochondrial, une étape clé du contrôle qualité de la traduction mitochondriale et de la maturation des composants de la phosphorylation oxydative. En couplant l’élimination du groupement formyle au traitement en aval et à la stabilité des protéines mitochondriales, PDF contribue à l’assemblage de la chaîne respiratoire, à la protéostasie mitochondriale et au métabolisme énergétique cellulaire. Les perturbations de la traduction mitochondriale et de la protéostasie sont largement associées aux réponses au stress bioénergétique, à une gestion altérée des espèces réactives de l’oxygène et aux voies de signalisation liées à l’apoptose. En conséquence, PDF est fréquemment étudiée dans le cadre des mécanismes de dysfonctionnement mitochondrial pertinents pour la neurodégénérescence, les phénotypes cardiométaboliques et l’adaptation métabolique des cellules cancéreuses.
PDF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.