PDE7B Lentiviral Activation Particles (h): sc-411961-LAC

Das humane Gen **PDE7B** kodiert die Phosphodiesterase 7B, ein cAMP-spezifisches Enzym, das zyklisches AMP zu 5′-AMP hydrolysiert und dadurch die Stärke und Dauer der PKA- und EPAC-abhängigen Signalübertragung formt. Durch die Kontrolle intrazellulärer cAMP-Pools beeinflusst PDE7B Transkriptionsprogramme, Zellüberleben und Differenzierung in Immun- und Nervensystemkontexten und greift in GPCR-getriebene Signalnetzwerke ein. Veränderte PDE7B-Expression oder -Aktivität wurde im Zusammenhang mit inflammatorischer Signalübertragung, Neurotransmission sowie der Biologie hämatologischer und neurologischer Erkrankungen untersucht, in denen die cAMP-Homöostase einen zentralen regulatorischen Knoten darstellt. PDE7B dient damit als nützlicher genetischer Ansatzpunkt, um Second-Messenger-Signalgebung und Pathway-Crosstalk in mechanistischen Zellmodellen zu analysieren.

PDE7B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PDE7B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PDE7B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PDE7B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PDE7B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PDE7B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.