Particules Lentivirales d'Activation (m) PDE6β: sc-422166-LAC

Le gène murin **Pde6b** code la sous-unité β de la phosphodiestérase 6 du cGMP des photorécepteurs à bâtonnets (PDE6β), un effecteur central de la cascade de phototransduction rhodopsine–transducine. Lors de l’activation induite par la lumière, PDE6β catalyse l’hydrolyse du cGMP, abaissant le cGMP intracellulaire afin de favoriser la fermeture des canaux activés par le cGMP et de façonner la réponse électrique du photorécepteur. Cet axe de signalisation régule l’homéostasie du cGMP et du Ca²⁺ dans les segments externes des bâtonnets et s’intègre à des processus en aval qui influencent la survie des photorécepteurs et le fonctionnement des circuits rétiniens. Une perturbation du renouvellement du cGMP dépendant de PDE6β est fortement associée à des phénotypes de dégénérescence rétinienne héréditaire, faisant de **Pde6b** une cible majeure pour les études mécanistiques de la fonction des bâtonnets et des déséquilibres de signalisation liés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales PDE6β (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pde6b dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PDE6β (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pde6b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PDE6β. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pde6b ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.