Pdcd-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422152-ACT

O gene Pdcd4 (programmed cell death 4) de camundongo codifica a Pdcd-4, uma proteína de ligação a RNA associada à supressão tumoral que reprime a tradução dependente de cap ao inibir a atividade helicase do eIF4A e ao modular a transcrição dependente de AP-1. A Pdcd-4 integra sinais de fatores de crescimento e de vias inflamatórias, e sua expressão é comumente reduzida por vias oncogênicas como PI3K/AKT/mTOR e por controle pós-transcricional mediado por microRNAs, influenciando proliferação, apoptose e diferenciação celular. Por esses mecanismos, a Pdcd-4 é frequentemente estudada em contextos de transformação, fenótipos relacionados à metástase e respostas ao estresse, bem como em biologia imune e inflamatória, em que o controle translacional molda programas de citocinas.

Pdcd-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pdcd4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pdcd-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pdcd4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pdcd4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pdcd-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pdcd4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pdcd-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pdcd-4 em células tumorais com expressão de Pdcd4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.