Pdcd-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403008-ACT

PDCD1 kodiert das programmierte Zelltodprotein 1 (PD‑1; Pdcd‑1), einen inhibitorischen Rezeptor, der vor allem auf aktivierten T‑Zellen und weiteren Immunzellsubtypen exprimiert wird und die Antigenrezeptor‑Signalübertragung begrenzt, um die periphere Toleranz aufrechtzuerhalten. Nach Bindung an seine Liganden rekrutiert PD‑1 Phosphatasen, die frühe TCR‑Signale abschwächen, wodurch die Aktivität der PI3K–AKT‑ und RAS–MAPK‑Signalwege reduziert wird und Zytokinproduktion sowie Proliferations‑ und Überlebensprogramme geprägt werden. Diese Checkpoint‑Achse ist zentral für die Immunhomöostase und ist häufig an Zuständen chronischer Antigenexposition beteiligt, bei denen eine anhaltende PDCD1‑Expression mit T‑Zell‑Dysfunktion und veränderten inflammatorischen Sollwerten einhergeht. Die Regulation von PDCD1 wird daher intensiv in der Tumorimmunologie, in Modellen persistenter Infektionen, bei Autoimmunität sowie im Kontext immunbezogener transkriptioneller Reprogrammierung untersucht.

Pdcd-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PDCD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pdcd-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PDCD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PDCD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pdcd-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PDCD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pdcd-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pdcd-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PDCD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.