PCTAIRE-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405470-NIC

CDK16は、セリン／スレオニンキナーゼであるPCTAIRE-1をコードしている。PCTAIRE-1はCDKファミリーの一員で、サイクリンや調節性補因子と複合体を形成し、細胞周期の進行、小胞輸送、細胞骨格のリモデリング、神経発生に関連するリン酸化プログラムの制御に関与する。PCTAIRE-1の活性は、プロテオスタシスやオートファジー関連過程とも関連づけられており、細胞ストレス応答に影響するタンパク質ターンオーバー経路の調節などが含まれる。ヒト細胞では、CDK16の発現量やキナーゼシグナルの変化が複数の疾患関連状況で報告されており、増殖、遊走、分化といった表現型に影響し得る。これらの特性により、CDK16は、機構解明研究においてキナーゼ制御型シグナルネットワークや経路間クロストークを解析するための有用なノードとなる。

PCTAIRE-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDK16 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDK16内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDK16の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDK16が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。