PCTAIRE-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405470-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PCTAIRE-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PCTAIRE-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PCTAIRE-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK16 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PCTAIRE-1: sc-53410
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PCTAIRE-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405470-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCTAIRE-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405470-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK16 kodiert die Serin/Threonin-Kinase PCTAIRE-1, ein Mitglied der CDK-Familie, das mit Cyclinen und regulatorischen Kofaktoren zusammenwirkt, um Phosphorylierungsprogramme zu steuern, die mit Zellzyklusprogression, Vesikeltransport, Zytoskelett-Remodeling und neuronaler Entwicklung verknüpft sind. Die Aktivität von PCTAIRE-1 wird zudem mit Proteostase- und autophagiebezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, einschließlich der Modulation von Proteinabbauwegen, die zelluläre Stressantworten beeinflussen. In menschlichen Zellen wurde eine veränderte CDK16-Expression oder Kinase-Signalgebung in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, wobei dies Proliferations-, Migrations- und Differenzierungsphänotypen beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen CDK16 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um in mechanistischen Studien kinasegesteuerte Signalnetzwerke und das Zusammenspiel verschiedener Signalwege zu untersuchen.
PCTAIRE-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK16-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK16 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK16-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK16-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.