Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCPE-2 (h): sc-411925

Présentation

PCOLCE2 code la protéine 2 amplificatrice de la procollagène C-endopeptidase (PCPE-2), une glycoprotéine associée à la matrice extracellulaire qui renforce le clivage des C-propeptides du procollagène par la protéase BMP1/de type tolloïde, favorisant ainsi la fibrillogenèse du collagène et la maturation de la matrice. En modulant le dépôt et le renouvellement du collagène, PCPE-2 contribue à des programmes de remodelage tissulaire liés à l’activation des fibroblastes, à la réparation des plaies et à la régulation de la mécanique du stroma. Une expression altérée de PCOLCE2 ou une activité modifiée de PCPE-2 a été impliquée dans le remodelage fibrotique et d’autres pathologies caractérisées par une organisation dérégulée de la matrice extracellulaire. Dans les systèmes humains, PCPE-2 constitue donc un point d’entrée pertinent pour étudier les voies de biosynthèse du collagène et les interactions entre les voies de signalisation pilotées par la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCPE-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCOLCE2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCOLCE2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCOLCE2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCPE-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCOLCE2 pour l'étude de la signalisation de PCPE-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCOLCE2 essentiels à la fonction de PCPE-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCOLCE2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PCPE-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCPE-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCOLCE2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PCPE-2 plasmide HDR (h) et le PCPE-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCOLCE2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCOLCE2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.