PCMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418153

概要

PCMT1は、タンパク質中のL-イソアスパラギン酸（D-アスパラギン酸）O-メチルトランスフェラーゼ1をコードします。これはSAM依存性のメチルトランスフェラーゼで、タンパク質に加齢やストレスによって生じるイソアスパルチル化損傷を修復します。具体的には、異常なAsp/Asn残基をメチル化し、正常な結合様式へ戻る変換を促進します。このタンパク質品質管理機能はプロテオスタシスを支え、機能不全で凝集しやすいタンパク質の蓄積を抑制することで、PCMT1を酸化ストレスに対する細胞応答や、細胞質および核内に存在する長寿命タンパク質の維持と結び付けます。PCMT1の機能は、タンパク質分解回転を制御する経路、シャペロンネットワーク、ストレス耐性に関わる仕組みと交差しており、タンパク質老化や翻訳後損傷の研究において重要です。PCMT1活性の変化は、タンパク質損傷や修復機構の破綻が細胞機能障害に寄与する神経生物学的文脈やその他の疾患領域でも検討されています。

PCMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCMT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCMT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCMT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PCMT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PCMT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCMT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PCMT1の機能に不可欠なPCMT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCMT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PCMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPCMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCMT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PCMT1 HDRプラスミド（h）および PCMT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCMT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCMT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。