PCIF1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407384-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PCIF1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PCIF1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PCIF1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PCIF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PCIF1: sc-374406
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PCIF1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407384-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCIF1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407384-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCIF1 (phosphorylated CTD interacting factor 1) ist eine mit der mRNA-Kappe assoziierte Methyltransferase, die die N6-Methylierung von 2′-O-methyladenosin am ersten transkribierten Nukleotid (m6Am) neben der m7G-Kappe katalysiert und damit die Landschaft kappenproximaler RNA-Modifikationen prägt. Über diese Aktivität beeinflusst PCIF1 die mRNA-Stabilität, die Translationseffizienz sowie transkriptspezifische Genexpressionsprogramme, die mit RNA-Prozessierung und epitranskriptomischer Regulation verknüpft sind. PCIF1-abhängiges m6Am wurde mit der Modulation zellulärer Stressantworten sowie entwicklungs- und proliferationsbezogener Signaloutputs über posttranskriptionelle Kontrolle in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation der kappenproximalen Methylierung und der PCIF1-Expression wurde unter anderem im Kontext der Tumorbiologie und der immunbezogenen Genexpression untersucht, was die Relevanz von PCIF1 für mechanistische Studien zu RNA-modifikationsgetriebenen Phänotypen unterstreicht.
PCIF1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PCIF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PCIF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PCIF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PCIF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.