Pcdhb3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430065

Übersicht

Pcdhb3 kodiert Protocadherin Beta 3, ein Mitglied der Familie der geclusterten Protocadherine, die an der kalziumabhängigen Zell-Zell-Adhäsion und der Etablierung neuronaler Identität beteiligt sind. Im Nervensystem tragen Protocadherine zur Synapsenbildung, zum Neuritenauswuchs sowie zu Self-Avoidance-Mechanismen bei, die die Konnektivität neuronaler Schaltkreise verfeinern. Die Funktion von Pcdhb3 steht im Zusammenhang mit membranständigen Adhäsionskomplexen und nachgeschalteten Prozessen der Zytoskelettorganisation, die die dendritische und axonale Musterbildung prägen. Eine Fehlregulation von Protocadherin-Genclustern wurde mit veränderten neuroentwicklungsbezogenen Verläufen und synaptischer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von Pcdhb3 in Modellen der Schaltkreisassemblierung und neurologischer Phänotypen unterstützt.

Das Pcdhb3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pcdhb3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pcdhb3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pcdhb3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pcdhb3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pcdhb3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pcdhb3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pcdhb3-Exone abzielen, die für die Pcdhb3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pcdhb3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pcdhb3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pcdhb3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pcdhb3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pcdhb3 HDR-Plasmid (m) und Pcdhb3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pcdhb3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pcdhb3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.