PBR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419383

Descripción general

El gen Tspo de ratón codifica el receptor benzodiazepínico periférico (PBR), una proteína de 18 kDa localizada principalmente en la membrana externa mitocondrial, que se une al colesterol y a las porfirinas y contribuye a la homeostasis mitocondrial. El PBR participa en el transporte de colesterol y en el metabolismo esteroidogénico, regula la permeabilidad mitocondrial y la señalización asociada a la apoptosis, e influye en el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y en las respuestas inflamatorias. La expresión de Tspo/PBR está enriquecida en la microglía activada y en células inmunitarias periféricas, y se utiliza ampliamente como marcador de neuroinflamación, con relevancia adicional para la disfunción mitocondrial observada en trastornos neurodegenerativos y en contextos de estrés metabólico. Estas funciones convierten a Tspo en un nodo útil para diseccionar redes de señalización ligadas a la mitocondria que acoplan el estrés celular con la activación inmunitaria y la remodelación tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PBR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tspo en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tspo junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tspo tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PBR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tspo para la investigación de la señalización de PBR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tspo críticos para la función de PBR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tspo para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PBR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PBR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tspo. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PBR (m) y el plásmido HDR PBR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tspo para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tspo definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.