PBEF Lentiviral Activation Particles (m): sc-425569-LAC

Das murine Nampt, auch bekannt als PBEF/Visfatin, kodiert die Nicotinamid-Phosphoribosyltransferase, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym des NAD‑Salvage‑Wegs, der Nicotinamid zu NMN umwandelt und so die zellulären NAD‑Pools aufrechterhält. Durch die Kontrolle der NAD‑Verfügbarkeit moduliert NAMPT sirtuin- und PARP‑abhängige Programme, die den mitochondrialen Stoffwechsel, Reaktionen auf oxidativen Stress, DNA‑Reparatur und inflammatorische Signalwege beeinflussen. Die NAMPT‑Aktivität verknüpft Nährstoffsensorik mit transkriptioneller und epigenetischer Regulation und wirkt sich auf Prozesse wie die Aktivierung von Immunzellen, die Biologie des Fettgewebes und die Anpassung an zellulären Stress aus. Eine dysregulierte NAMPT/NAD‑Homöostase wurde mit Stoffwechselstörungen, neuroinflammatorischen Zuständen und der bioenergetischen Umprogrammierung von Tumorzellen in Verbindung gebracht, was NAMPT zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

PBEF Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nampt-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PBEF Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nampt-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PBEF-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nampt-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.