Pax CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402171-ACT

PAX2 は、ペアードボックス転写因子 Pax2 をコードしており、胚発生におけるパターニングと系譜決定に必須の、配列特異的 DNA 結合型の転写制御因子である。特に発生中の腎臓、泌尿生殖器、眼、中枢神経系で重要な役割を担う。Pax2 は、WNT、FGF、NOTCH などの発生シグナル伝達経路と交差する転写ネットワークを介して、上皮分化、細胞生存、形態形成を制御する遺伝子プログラムを統合的に調節する。PAX2 の発現異常や変異は、腎・尿路の先天異常や眼の発生異常と関連しており、さらに Pax2 活性の変化は、異常増殖や系譜可塑性といった文脈でも研究されている。発生制御因子として、PAX2 は腎形成モデル、オルガノイド系、上皮アイデンティティの研究におけるマーカーおよび機能的ハブとして広く用いられている。

Pax-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pax-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pax-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPax-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPax-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。