Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-1 (m): sc-422114

Présentation

Le gène murin Pax1 code le facteur de transcription à boîte appariée Pax-1, une protéine nucléaire se liant à l’ADN qui régule la spécification des lignages et la mise en place des patrons au cours de l’embryogenèse, en particulier dans le mésoderme paraxial et la colonne vertébrale en développement. Pax-1 intègre des signaux développementaux afin de contrôler des programmes transcriptionnels impliqués dans la chondrogenèse, la différenciation du sclérotome et l’organisation segmentaire du squelette axial. Une altération de la fonction de Pax1 a été associée à des malformations vertébrales et squelettiques congénitales et Pax1 est utilisé comme marqueur et régulateur dans les études de la formation de la colonne vertébrale et du développement musculo-squelettique. Dans des modèles cellulaires, l’activité de Pax-1 est étudiée pour ses effets sur les réseaux transcriptionnels qui gouvernent la prolifération et la différenciation dans des contextes de progéniteurs mésenchymateux et cartilagineux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pax1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pax1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pax1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pax-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pax1 pour l'étude de la signalisation de Pax-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pax1 essentiels à la fonction de Pax-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pax1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pax-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pax-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pax1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pax-1 plasmide HDR (m) et le Pax-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pax1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pax1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.