PAWP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406196

Descripción general

WBP2NL codifica PAWP (proteína de unión al dominio WW postacrosomal), un factor transportado por el espermatozoide y enriquecido en la vaina postacrosomal que contribuye a la activación del ovocito durante la fecundación. PAWP contiene motivos PPXY que interactúan con adaptadores de señalización que contienen dominios WW, conectándola con redes reguladoras dependientes de fosforilación implicadas en las oscilaciones tempranas de calcio embrionario y la reanudación del ciclo celular. Los estudios funcionales asocian una expresión o actividad alteradas de PAWP con una fecundación deficiente, un desarrollo embrionario anómalo y ciertas formas de infertilidad masculina. Como regulador específico de células germinales, WBP2NL ofrece un modelo abordable para analizar la señalización espermatozoide–óvulo, el control de calidad de los gametos y la interacción entre vías reproductivas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAWP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WBP2NL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WBP2NL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WBP2NL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAWP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WBP2NL para la investigación de la señalización de PAWP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WBP2NL críticos para la función de PAWP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WBP2NL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAWP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAWP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WBP2NL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAWP (h) y el plásmido HDR PAWP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WBP2NL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WBP2NL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.