Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401719
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PAR-4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PAR-4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PAR-4 Anticorpo (5F4): sc-293206
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401719 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
F2RL3 codifica o receptor ativado por protease 4 (PAR-4), um receptor acoplado à proteína G responsivo à trombina que converte sinais extracelulares de proteases em mobilização intracelular de cálcio e cascatas de quinases. O PAR-4 acopla-se às vias Gq e G12/13 para regular a sinalização de PLCβ, a remodelação do citoesqueleto dependente de RhoA e programas a jusante de MAPK e NF-κB que moldam os estados de ativação celular. Em plaquetas humanas e células associadas ao sistema vascular, o PAR-4 contribui para a sinalização hemostática e inflamatória e interage com vias ligadas à coagulação que influenciam a adesão celular e respostas de barreira. Alterações na atividade de F2RL3/PAR-4 têm sido investigadas em contextos como a biologia relacionada à trombose, a inflamação vascular e a sinalização associada ao microambiente tumoral, nos quais pistas de proteases modulam a proliferação e a motilidade.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene F2RL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do F2RL3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do F2RL3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAR-4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de F2RL3 para a investigação da sinalização de PAR-4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) F2RL3 críticos para a função PAR-4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos F2RL3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus F2RL3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PAR-4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PAR-4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia F2RL3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo F2RL3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.