PAO Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432791

Descripción general

El gen **Smox** en ratón codifica la **oxidasa de poliaminas (PAO)**, una enzima dependiente de flavina que cataliza la reconversión de poliaminas, contribuyendo a la homeostasis de la espermina y la espermidina y regulando el flujo intracelular de poliaminas. La actividad de la PAO conecta el metabolismo de las poliaminas con el equilibrio redox celular mediante la producción de peróxido de hidrógeno y aldehídos reactivos, influyendo en las respuestas al estrés oxidativo, la función mitocondrial y la señalización inflamatoria. La regulación alterada de SMOX/PAO se ha asociado con proliferación desregulada, mayor susceptibilidad al daño del ADN y contextos de lesión tisular en los que confluyen el recambio de poliaminas y la señalización por especies reactivas de oxígeno (ROS), incluidos modelos de biología del cáncer y de neuroinflamación. Como nodo metabólico, la PAO ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar cómo el catabolismo de poliaminas modula decisiones sobre el destino celular y vías adaptativas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAO (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Smox en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Smox junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Smox tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAO.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Smox para la investigación de la señalización de PAO, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Smox críticos para la función de PAO
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Smox para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAO CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAO CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Smox. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAO (m) y el plásmido HDR PAO (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Smox para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Smox definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.