Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-424967-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Pannexin-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Pannexin-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Panx1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424967-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424967-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Panx1 kodiert Pannexin‑1, einen großporigen Membrankanal, der die Freisetzung von ATP und Metaboliten vermittelt und dadurch autokrine und parakrine purinerge Signalübertragung prägt. Die Aktivität von Pannexin‑1 wird nachgeschaltet an die Stimulation des P2X7‑Rezeptors sowie durch entzündliche Signale aktiviert und koppelt Membrandepolarisation und kaspaseassoziierte Signalwege an die extrazelluläre Nukleotid‑Signalgebung. In Mausgeweben trägt Panx1 zur Aktivierung von Immunzellen, zu inflammasom‑gekoppelten Antworten und zu koordinierten Calcium‑Dynamiken bei; weitere Funktionen umfassen die Regulation des Gefäßtonus und die neuron‑gliale Kommunikation. Eine fehlregulierte, PANX1‑abhängige ATP‑Freisetzung wurde in Modellen von Neuroinflammation, ischämischer Schädigung und aberranter Zelltod‑Signalgebung in Verbindung gebracht, wodurch Panx1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Entzündung und Stressantworten darstellt.
Pannexin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Panx1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Panx1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Panx1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Panx1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.