Pannexin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401635-ACT

PANX1 kodiert Pannexin-1, einen großporigen Plasmamembran-Kanal, der die Freisetzung von ATP und Metaboliten vermittelt, um purinerge Signalübertragung und parakrine Kommunikation zu koordinieren. Die Aktivität von Pannexin-1 ist an Membrandepolarisation, mechanischen Stress und entzündliche Signale gekoppelt und beeinflusst dadurch die Ca²⁺-Dynamik, inflammasomassoziierte Signalwege sowie das Remodeling des Zytoskeletts. Durch die Regulation des extrazellulären Nukleotidtonus und von „Find-me“-Signalen während der Apoptose trägt PANX1 zur Rekrutierung von Immunzellen, zur Zellmigration und zur Gewebehomöostase bei. Eine Fehlregulation der PANX1-Signalgebung wurde in der Literatur mit Neuroinflammation, schmerzassoziierten Signalwegen, ischämiebedingten Verletzungsantworten und Interaktionen im Tumor–Immun-Mikroumfeld in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Modellen unterstützt.

Pannexin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PANX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pannexin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PANX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PANX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pannexin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PANX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pannexin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pannexin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PANX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.