PAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422110

Übersicht

Die Peptidylglycin-α-amidierende Monooxygenase (PAM), kodiert durch das Mausgen *Pam*, ist ein bifunktionelles Enzym, das die C-terminale Amidierung vieler Neuropeptide und Peptidhormone katalysiert – eine Modifikation, die für die volle Bioaktivität erforderlich ist. Dieser kupfer- und ascorbatabhängige Signalweg unterstützt die Peptidreifung innerhalb des sekretorischen Weges und beeinflusst die regulierte Sekretion in neuroendokrinen und neuronalen Zellen. Die *Pam*-Aktivität verknüpft die Vesikelbiogenese und die Funktion sekretorischer Granula mit Neuropeptid-Signalnetzwerken, die die synaptische Transmission, Stressantworten, den Stoffwechsel und die kardiovaskuläre Homöostase modulieren. Eine fehlregulierte Peptidamidierung und veränderte PAM-Funktion wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen, endokrinen Ungleichgewichten sowie kardiometabolischen Merkmalen in Verbindung gebracht, wodurch *Pam* ein nützlicher Genort für mechanistische Studien zur Biologie des sekretorischen Weges ist.

Das PAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pam-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pam-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pam nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pam-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pam-Exone abzielen, die für die PAM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pam-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pam-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAM HDR-Plasmid (m) und PAM HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pam-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pam-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.